附录二  医学实验动物标准

 

                中华人民共和国卫生部

                     一九九二年

 

    本标准是根据中华人民共和国国家科学技术委员会令（第２号）《实验动物管理条例》和《卫生部医学实验动物管理实施细则》的规定，为控制医学实验动物质量和动物实验科学要求，促进科学与经济的发展而制定的。

    请各医学实验动物管理委员会和应用实验动物的单位遵照执行。

 

                                                    中华人民共和国卫生部

                                                      一九九二年十二月

 

                      目  录

哺乳类医学实验动物遗传标准………………………………………………………（  １）

医学实验动物保种标准………………………………………………………………（１２）

医学实验动物微生物学、寄生虫学标准……………………………………………（１３）

医学实验动物病理标准………………………………………………………………（２３）

医学实验动物全价营养饲料标准……………………………………………………（２４）

医学实验动物生态环境及设施………………………………………………………（３０）

 

 

              哺乳类医学实验动物的遗传标准

 

   Genetic standards of Medical Mammal Laboratory animals

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    １  主要内容与适用范围

    本标准规定哺乳类实验动物的遗传分类及命名原则、繁殖交配方法和近交系动物的遗传质量标准。

    本标准适用于哺乳类实验动物的遗传分类、命名、繁殖及近交系小鼠、大鼠的遗传纯度检测。

    ２  实验动物的遗传分类及命名

    根据遗传特点的不同，实验动物分为近交系动物和封闭群动物。

    ２.１  近交系

    Inbred strain

    经至少连续２０代的全同胞兄妹交配培育而成，品系内所有个体都可追溯到起源于第２０代或以后代数的一对共同祖先，该品系称为近交系。

    经连续２０代以上亲代与子代交配与全同胞兄妹交配有等同效果。

    近交系的近交系数（Inbreeding coefficient）应大于９９％。

    ２.１.２  命名

    近交系一般以大写英文字母命名，亦可以用大写英文字母加阿拉伯数字命名，符号应尽量简短。如Ａ系、ＴＡ１系等。

    ２.１.３  近交代数

    近交系的近交代数用大写英文字母Ｆ表示。例如当一个近交系的近交代数为８７代时，写成（Ｆ８７）。

    ２.１.４  亚系

    Substrain

    ２.１.４.１  亚系的形成

    近交系的亚系分化是指一个近交系内各个分支的动物之间，已经发现或十分可能存在遗传差异。通常下述三种情况会发生亚系分代。

    a.在兄妹交配代数达４０代以前形成的分支（也即分支发生于Ｆ２０到Ｆ４０之间）

    b.一个分支与其它分支分开繁殖超过１００代。

    c.已发现一个分支与其它分支存在遗传差异。产生这种差异的原因可能是残留杂合、突变或遗传传染（Genetic contamination ）（即一个近交系与非本品系动物之间杂交引起遗传改变）。由于遗传污染形成的亚系，通常与原品系之间遗传差异较大，因此对这样形成的亚系应重新命名。例如，由GLaxo保持的Ａ近交系在发生遗传污染后， 重新命名为Ａ２Ｇ。

    ２.１.４.２  亚系的命名

    亚系的命名方法是在原品系的名称后加一道斜线，斜线后标明亚系的符号。

    亚系的符号可以是以下三种：

    a.数字、如ＤＢＡ／１、ＤＢＡ／２等。

    b.培育或产生亚系的单位或人的缩写英文名称，第一个字母用大写，以后的字母用小写。使用缩写英文名称时应注意不要和已公布过的名称重复。例如：A／H e，表示Ａ近交系的Heston亚系；CBA／J，由美国杰克逊研究所保持的CBA近交系的亚系。

    c.当一个保持者保持的一个近交系具有两个以上的亚系时，可用在数字后再加保持者的缩写英文名称来表示亚系。如：C57BL／6J，C57BL／10J 分别表示由美国杰克逊研究所保持的C57BL近交系的两个亚系。

    d.作为以上命名方法的例外情况是一些建立及命名较早，并为人们所熟知的近交系，亚系名称可用小写英文字母表示，如BALB／c、C57BR／cd等。

    ２.１.５  支系

    Subline

    ２.１.５.１  支系的形成

    产生支系的具体情况有：

    a.经人为技术处置形成，如卵子移植，人工喂养，代乳，卵巢移植或胚胎冷冻等。

    b.种群转移到新的保持者。

    ２.１.５.２  支系的命名

    a.经人为技术处置形成的支系，应在原品系名称后附加一个小写英文字母标明处理方式，具体符号是：

    卵子移植                  e

    奶母代乳                  f

    人工喂养                  h

    卵巢移植                  o

    人工喂养加奶母代乳        fh

    代乳的奶母动物或接受移植的卵子、卵巢的受体动物在上述符号后标明品系名称或缩写的品系名称。如：C3Hf、C57BL、C3HfB都是表示由C56BL品系代乳的 C3H 近交系。C3HeB表示C3H近交系的受精卵移植于C57BL品系雌鼠。

    b.用代乳等人为技术处置的目的之一是去除或植入重垂直感染的病毒。当去除或植入的病毒十分明确时，用下面方法表示：在品系名称后加一横线，以大写英文字母标明病毒名称，最后加上一个“＋”或“－”的符号，分别表示植入或去除。例如：C3H ／HeN-MTV+，表示将纯化的小鼠胸腺病毒接种于剖腹手术取得的C3H／HeN品系的幼鼠。

    c.一个近交系引种到另一个单位时，由于环境条件的改变，随着繁殖代数的增加，也可能产生遗传上的差异。引种形成的支系用下法表示：原品系或亚系名称后加一斜线，然后标明引入单位的英文缩写名称。如C57BL／6J／Lac表示由英国实验动物中心（Lac）保持的C57BL／6J近交系的支系。

    经过数次引种的支系，一般只在品系或亚系名称后标明现在保种单位的名称，而不累计式地依次标明各中间引种单位的名称。

    ２.１.６  重组近交系

    Recombinant inbred strain

    ２.１.６.１  定义

    由两个近交系杂交后，经连续２０代以上兄妹交配育成的近交系，称为重组近交系。

    ２.１.６.２  命名

    由两个亲代近交系的缩写名称中间加大写英文字母Ｘ命名。由相同双亲交配痛成的一组近交系用阿拉伯数字予以区分。

    例如：由BALB/c和C57BL两个近交系杂交育成的一组重组近交系，分别命名为CXB1、CXB2、……

    对常用近交系小鼠的缩写名称规定如下：

    近交系              缩写名称

    C57BL/6                B6

    BALB/c                 C

    DBA/2                  D2

    C3H                    C3

    CBA                    CB

    ２.１.７  同源突变近交系

    Coisogenic inbred strain

    ２.１.７.１  定义

    两个近交系，除了在一个指明位点等位基因不同外，其它遗传基因全部相同。称为同源突变近交系，简称同源突变系。

    同源突变系一般皆由近交系发生基因突变而形成。

    ２.１.７.２  命名

    由发生突变的近交系名称后加突变基因符号（用巩斜体印刷体）组成，二者之间以连接号分开。如：DBA/Ha-D

    当突变基因必须以杂合子形式保持时，用“＋”号代表野生型基因，如A/Fa-+/c

    ２.１.８  同源导入近交系

    Congenic inbred strain

    ２.１.８.１  定义

    通过杂交一互交（Cross-intercross）或回交（Backcross ）等方式将一个基因导入到近交系中，由此形成的一个新的近交系与原来的近交系只是在一个很小的染色体片段上的基因不同，称为同源导入近交系，简称同源导入系。

    ２.１.８.２  命名

    同源导入系名称由以下三部分组成：

    a.接受导入基因的近交系名称；

    b.提供导入基因的近交系的缩写名称，并与a之间用英文句号分开；

    c.导入基因的符号（用英文斜体），与b之间以连字符分开。

    例如：B10·129-H-12b

    表示该同源导入近交系的遗传背景为C57BL/10sn（=B10），导入B10的基因为H-12b，基因提供者为129/J近交系。

    ２.２  封闭群（远交群）

    Closed colony or outbred stock

    ２.２.１  定义

    以非近交亲交配方式进行繁殖生产的一个实验动物种群，在不从其外部引入新个体的条件下，至少连续繁殖４代以上，称为一个封闭群，或叫远交群。

    ２.２.２  命名

    封闭群由２－４个大写英文字母命名：种群名称前标明保持者的英文缩写名称，第一个字母须大写，后面的字母小写，一般不超过４个字母。保持者与种群名称之间用冒号分开。

    例如：N: NIH表示由美国国立卫生研究院（N）保持的NIH封闭群小鼠。

    Lac: LACA表示由英国实验动物中心（Lac）保持的LACA封闭群小鼠。

    某些命名较早，又广为人知的封闭群动物，名称与上述规则不一致时，仍可沿用其原来的名称。如：Wistar大鼠封闭群，日本的ddy封闭群小鼠等。

    把保持者的缩写名称放在种群名称的前面，而二者之间用冒号分开，是封闭群动物与近交系动物命名中最显著的区别。除此之外，近交系命名中的规则及符号也适用于封闭群动物的命名。

    ３  实验动物的繁殖方法

    由于近交系与封闭群动物具有不同的遗传特点。因此应分别选择相应的繁殖方法。

    ３.１  近交系动物的繁殖方法

    选择近交系动物繁殖方法的原则，是保持近交系动物的同基因性及其基因纯合性。

    ３.１.１  引种

    作为繁殖用原咱的近交系动物必须遗传背景明确，来源清楚，较完整的资料（包括品系名称、近交代数、遗传基因特点及主要生物学特征等）。引种动物应来自近交系的基础群（Foundation stock）。

    ３.１.２  近交系动物的繁殖可分为基础群（ Foundation stock ）、  血缘扩大群（Pedigree expansion stock）和生产群（Production stock）。当近交系动物生产供应数量不是很大时，一般不设血缘扩大群，仅设基础群和生产群。

    ３.１.２.１  基础群

    设基础群的目的，一是保持近交系自身的传代繁衍，二是扩大繁殖提供种动物。

    a.基础群严格以全同胞兄妹交配方式进行繁殖。

    b.基础群应设动物个体记录卡（包括品系名称、近交代数、动物编号、出生日期、双亲编号、离乳日期、交配日期、生育记录等）和繁殖系谱。

    c.基础群（包括血缘扩大群）动物不超过５－７代都应能追溯到一对共同祖先。

    ３.１.２.２  血缘扩大群

    血缘扩大群的种动物来自基础群。

    a.血缘扩大群以全同胞兄妹交配方式进行繁殖。

    b.血缘扩大群动物应设个体繁殖记录卡。

    c.血缘扩大群动物不超过５－７代都应追溯到其在基础群的一对共同祖先。

    ３.１.２.３  生产群

    生产群的目的是生产供应实验用近交系动物。生产群种动物来自基础群或血缘扩大群。

    a.生产群动物一般以随机交配方式进行繁殖。

    b.生产群动物应设繁殖记录卡。

    c.生产群动物随机交配繁殖代数一般不应超过３－５代。

    ３.２  封闭群动物的繁殖方法

    选择封闭群动物繁殖方法的原则，是尽量保持封闭群动物的基因异质性及多态性，避免近交系数随繁殖代数增加而过快上升。

    ３.２.１  引种

    作为繁殖用原种的封闭群动物必须遗传背景明确，来源清楚，有较完整的资料（包括种群名称、来源、遗传基因特点及主要生物学特性等）。

    为保持封闭群动物的遗传异质性及基因多态性，引种动物数量要足够多，小型啮齿类封闭群动物引种数目一般不能少于２５对。

    ３.２.２  繁殖

    为保持封闭群动物的遗传基因的稳定，封闭群应足够大，并尽量避免近交交配。根据封闭群的大小，选用循环交配法等方法进行繁殖。具体方法如附录Ａ（补充件）所示。

    ４  近交系动物的遗传质量监测

    Genetic quality control of inbred strains of animals

    ４.１  近交系动物的遗传质量标准

    近交系动物必须符合以下要求：

    ４.１.１  具有明确的品系背景资料，包括品系名称、近交代数、遗传组成、主要生物学特性等，并能充分表明新培育的或引种的近交系动物符合近交系定义的规定。

    ４.１.２  用于近交系保种及生产的繁殖系谱及记录卡应清楚完整，繁殖方法科学合理。

    ４.１.３  经遗传检测质量合格。

    ４.２  近交系小鼠、大鼠遗传检测方法及实施

    ４.２.１  皮肤移植法

    Skin grafting

    每个品系随机抽取至少４只相同性别的成年动物，进行同系异体皮肤移植。移植全部成功者判为合格，发生非手术原因引起的移植物的排斥为不合格。

    ４.２.２  生化标记基因检测

    Biochemicall markers

    ４.２.２.１  抽样

    按表１要求从每个近交系中随机抽取成年动物，雌雄各半。

    表１

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    生产群中雌性种鼠数量                           抽样数目

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    100只以下                                      6只

    100只以上                                      ≥6％

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    ４.２.２.２  生化标记基因的选择及常用近交系动物的生化遗传概貌

    近交系小鼠选择位于１０个染色体上的１３个生化位点，近交系大鼠选择７个生化位点，做为遗传检测的生化标记。以上生化标记基因的名称及常用近交系动物的生化标记遗传概貌见附录Ｂ。

    ４.２.２.３  结果判断

    见表２

            表２

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          检测结果      │     判      断     │     处      理

    ──────────┼──────────┼───────────

    与标准遗传概貌完全一│未发现遗传变异，遗传│

    致                  │质量合格            │

    ──────────┼──────────┼───────────

                        │                    │增加检测位点数目和增

    有一个位点的标记基因│可疑                │加检测方法后重检，确

    与标准遗传概貌不一致│                    │实只有一个标记基因改

                        │                    │变可命名为同源突变系。

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    两个或两个以上位点的│                    │

    标记基因与标准遗传概│不合格              │淘汰，重新引种。

    貌不一致            │                    │

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    ４.３  除以上两种方法外， 还可选用其它方法对近交系动物进行遗传质量检测，如毛色基因测试（Coat color gene testing）、免疫标记基因检测（ Immunogenetic markers）、下颌骨测量法（Mandible measurement）、染色标记检测（Cytogenetic techniques）等。

    ４.４  检测时间间隔

    近交系动物每年至少进行一次遗传质量检测。

 

              附录Ａ  实验动物封闭群的繁殖方法（补充件）

 

    Ａ１  基本要求

    保持封闭群条件，无选择，以非近交交配方式进行繁殖，每代近交系数上升不超过百分之一。

    Ａ２  方法的选择

    封闭群的种群大小、选种方法及交配方法是影响封闭群的繁殖过程中近交系数上升的主要因素，应根据种群的大小，选择适宜的繁殖交配方法。

    Ａ２.１  当封闭群中每代交配的雄种动物数目为１０只至２５只时， 一般采用最佳避免近交法，也可采用循环交配法。

    Ａ２.２  当封闭群中每代交配的雄种动物数目为２６只至１００只时， 一般采用循环交配法。也可采用最佳避免近交法。

    Ａ２.３  当封闭群中每代交配的雄种动物数目多于１００只时， 一般采用随选交配法，也可采用循环交配法。

    Ａ３  交配方法

    Ａ３.１  最佳避免近交法

    Maximum avoidance of inbreeding system

    Ａ３.１.１  留种

    每只雄种动物和每只雌种动物分别从子代各留一只雄性动物和雌性动物，作为繁殖下一代的种动物。

    Ａ３.１.２  交配

    动物交配时，尽量使亲缘关系较近的动物不配对繁殖，编排方法尽量简单易行。

    a.对某些动物品种，如小鼠、大鼠等，生殖周期较短，易于集中安排交配, 可按下述方法编排配对进行繁殖：假设一个封闭群有１６对种动物，分别标以笼号１、２、３、……１６。设n为繁殖代数（n为自１开始的自然数）。n代所生动物于n＋１代交配编排见表Ａ１。

                     表Ａ１  最佳避免近交法的交配编排

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        n＋１代笼号        雌种来自n代笼号        雄种来自n代笼号

    ───────────────────────────────

            １                    １                    ２

            ２                    ３                    ４

            ３                    ５                    ６

            ：                    ：                    ：

            ：                    ：                    ：

            ８                   １５                  １６

            ９                    ２                    １

           １０                   ４                    ３

            ：                    ：                    ：

            ：                    ：                    ：

           １６                  １６                  １５

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    b.某些动物品种：如狗、猫、家兔等，生殖周期较长，难于按上述方式编排交配。只要保持种群规模不低于１０只雄种，２０只雌种的水平；留种时每只雌、雄种各留一只子代雌、雄动物作种；交配时尽量避免近亲交配，则可民把繁殖中每代近交系数的上升控制在较低的程度。

    Ａ３.２  循环交配法

    Rotational mating system

    Ａ３.２.１  应用范围

    循环交配法广泛适用于中等规模以上的实验动物封闭群，其优点一是可以避免近亲交配，二是可以保证种动物对整个封闭群有比较广泛的代表性。

    Ａ３.２.２  实施办法

    a.将封闭群划分成若干个组，每组包含有多个繁殖单位（一雄一雌单位，一雄二雌单位，一雄多雌单位等）。

    b.安排各组之间以系统方法进行交配。

    举例说明如下：

    例１：一封闭群每代有４８笼繁殖用种动物（一雄种一雌种，或一雄种多雌种）。先将其分成８个组，每组有６笼，各组内随机选留一定数量的种动物，然后在各组之间按以下排列方法进行交配（见表Ａ２）；

                      表Ａ２  循环交配法组间交配编排

      ━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━

        新组编号            雄种动物原组编号        雌种动物原组编号

           １                      １                      ２

           ２                      ３                      ４

           ３                      ５                      ６

           ４                      ７                      ８

           ５                      ２                      １

           ６                      ４                      ３

           ７                      ６                      ５

           ８                      ８                      ７

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    Ａ３.３  随选交配法

    Chance mating system

    Ａ３.３.１  应用范围

    当封闭群的动物数量非常多（繁殖种动物在１００个繁殖单位以上），不易用循环交配法进行繁殖时，可用随选交配法。

    Ａ３.３.２  实施办法

    从整个种群中随机选取种动物，然后任选雌雄种动物交配繁殖。

 

                   附录Ｂ  常用近交系小鼠、大鼠的生化标记基因（补充件）

 

                          表Ｂ１  常用近交系小鼠的生化标记基因

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                      生化标记                    │        主要近交系小鼠的标记基因

    ───────────────────────┼───────────────────────

    符号    染色体          中文名称              │

            位  置                                │  A    AKR    C3H/He   C57BL/6    CBA/N

    ───────────────────────┼───────────────────────

    Car-2      3      碳酸酐酶－２                │  b     a       b          a         a

    Ce-2      17      过氧化氢酶－２              │  a     b       b          a         b

    Es-1       8      酯酶－１                    │  b     b       b          a         b

    Es-3      11      酯酶－３                    │  c     c       c          a         c

    Es-10     14      酯酶－１０                  │  a     b       b          a         b

    Gpd-1      4      葡萄糖－６－磷酸脱氢酶－１  │  b     b       b          a         b

    Gpi-1      7      葡萄糖磷酸异构酶－１        │  a     a       b          b         b

    Hbb        7      血红蛋白β链                │  d     s       d          s         d

    Id-1       1      异柠檬酸脱氢酶－１          │  a     b       a          a         b

    Mod-1      9      苹果酸酶－１                │  a     b       a          b         b

    Mup-1      4      尿主蛋白－１                │  a     a       a          b         a

    pgm-1